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Nombre de bactéries viables



Interprétation

La méthode de comptage des bactéries vivantes est également appelée méthode de comptage indirect. La méthode de comptage direct mesure le nombre total de cellules mortes et vivantes, tandis que la méthode de comptage indirect ne mesure que le nombre de cellules viables. La valeur obtenue par ce type de méthode est souvent inférieure à la valeur obtenue par la méthode de comptage direct. Les méthodes de comptage des bactéries vivantes comprennent généralement le comptage des colonies sur plaques, la méthode du nombre maximum probable de sélection diluée dans un liquide (nombre le plus probable, NPP) et la méthode de comptage par filtration sur membrane.

Méthode d'opération

Nombre de colonies de plaques

Cette méthode est basée sur le fait que chaque cellule vivante dispersée a la capacité de se reproduire et de former une colonie lors de la naissance. Par conséquent, le nombre de bactéries est le nombre de bactéries viables contenues dans l'échantillon à tester. Une fois que la solution d'essai microbienne unicellulaire est diluée par une série de 10 fois, la solution de dilution d'une certaine concentration est inoculée quantitativement sur le milieu de la plaque d'agar pour la culture. Le nombre de colonies cultivées est le nombre de cellules viables contenues dans la solution de dilution, et l'approvisionnement peut être calculé. Mesurer le nombre de cellules viables dans l'échantillon. Cependant, il convient de noter que pour diverses raisons, une seule colonie sur la plaque peut ne pas être formée par une seule cellule bactérienne. Par conséquent, lorsque le nombre de bactéries dans un échantillon unitaire est exprimé, il peut être exprimé en termes de nombre de bactéries formées dans l'échantillon unitaire, c'est-à-dire CFU/ml ou CFU/g (CFU signifie unité formant colonie) .

Mesure par la méthode du nombre maximum probable (MPN) de la sélection de liquide dilué

Prendre une suspension microbienne unicellulaire quantitative (1 ml) et utiliser le milieu de culture Faire des dilutions quantitatives en série de 10 fois, répéter 3 à 5 fois et placer les tubes de dilution en série de différentes dilutions à une température appropriée pour la culture. Sous le principe d'une dilution appropriée, une croissance bactérienne apparaîtra dans le tube de dilution avec une concentration bactérienne relativement élevée, et il n'y aura pas de croissance bactérienne dans le tube de dilution avec une dilution plus élevée du tube de dilution avec une dilution plus élevée. Dans l'ordre du degré de dilution de faible à élevé, le degré de dilution des 3 derniers tubes de dilution avec un degré de dilution relativement élevé et une croissance bactérienne est appelé ordre critique. Obtenez l'exposant de la série de trois séries critiques consécutives de 3 à 5 répétitions, vérifiez le tableau de probabilités maximales répétitives correspondant pour trouver le nombre maximum possible, puis multipliez-le par la plus faible dilution de la série critique où se produit la croissance. Concentration d'échantillon relativement fiable de bactéries viables.

Méthode de comptage par filtration membranaire

Lors de la détermination du nombre de bactéries viables dans l'eau et l'air, en raison de la faible concentration de bactéries, l'échantillon à tester peut être le premier (un certain volume d'eau ou d'air) est filtré et concentré à travers une membrane microporeuse (telle qu'une membrane de nitrocellulose ), puis la membrane est cultivée sur un milieu solide approprié, et les bactéries peuvent être comptées après leur croissance.

Précautions d'emploi

Cette méthode peut provoquer une pollution due à une utilisation non qualifiée, ou provoquer des résultats instables en raison d'une température moyenne excessive et d'endommager les cellules. Néanmoins, parce que cette méthode peut mesurer le nombre de microbes dans l'échantillon, elle reste une méthode efficace pour mesurer le nombre de bactéries couramment utilisées dans l'enseignement, la recherche scientifique et la production. La quantité de bactéries, levures, bourgeons et spores contenus dans le sol, l'eau, le lait, la nourriture et d'autres matériaux peuvent tous être déterminés par cette méthode. Mais il ne convient pas pour mesurer les micro-organismes filamenteux dans les échantillons, tels que les actinomycètes ou les champignons filamenteux ou les cyanobactéries filamenteuses et autres corps végétatifs.

Autres méthodes

En plus des deux méthodes de comptage couramment utilisées ci-dessus, il existe la méthode de filtration sur membrane et la méthode turbidimétrique. La méthode de filtration membranaire consiste à faire passer un certain volume d'eau de lac, d'eau de mer ou d'eau potable à travers la membrane filtrante lorsque le nombre de bactéries dans l'échantillon est très faible. Ensuite, la membrane filtrante est séchée, colorée et traitée pour rendre la membrane transparente, puis le nombre de bactéries sur la membrane (ou dans une certaine zone) est calculé au microscope ; le principe de la turbidimétrie est que la concentration cellulaire dans la suspension bactérienne se situe dans une certaine plage. La turbidité est directement proportionnelle à la densité optique. Plus il y a de bactéries, plus la densité optique est élevée. Par conséquent, à l'aide d'un spectrophotomètre, à une certaine longueur d'onde, la densité optique de la suspension bactérienne peut être mesurée et la densité optique (DO) est utilisée pour exprimer la quantité de bactéries. La mesure expérimentale doit être contrôlée dans la plage linéaire où la concentration bactérienne est proportionnelle à la densité optique, sinon elle sera imprécise. La méthode de comptage microbien se développe rapidement et il existe diverses méthodes telles que des instruments et dispositifs rapides, simples et automatisés.

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